StrepB Agar

Principio

Lo StepB agar (Fig.1) è un terreno cromogeno per il differenziamento e l’isolamento degli streptococchi di gruppo B tra cui, molto noto, Streptococcus agalactiae.
Quest’ultimo, infatti, è causa di severe infezioni neonatali che interessano i bambini nelle prime tre settimane di vita (periodo estremamente delicato).
Siccome diversi studi dell’OMS (Organizzazione Mondiale della Sanità) mostrano che il 12-27% delle donne incita è interessato dal patogeno, diventa di sempre più vitale importanza rilevarne la presenza entro le 34-38 settimane di gestazione.
Per queste ragioni, il terreno di coltura StrepB risulta essere particolarmente indicato nella fase di screening preventivo.

Composizione e preparazione

Il terreno è dato da una base in polvere (B) e da due supplementi (S1 + S2) dalla seguente composizione (Tab.1):

Il pH finale del mezzo deve essere di 7,3 +/- 0,2.

Per quanto riguarda la preparazione di 1 l di miscela, è necessario seguire questi passaggi:

Fase 1 (Base + S1)

• Sciogliere con attenzione 44,7 g di polvere base (B) in 1 l di acqua purificata;
• Aggiungere 8 ml di supplemento (S1);
• Mescolare fino a quando l’agar non si solidifica del tutto;
• Autoclavare a 121°C per 15 minuti;
• Far raffreddare fino a 45-50°C, in agitazione.

Fase 2 (S2)

• Versare in un recipiente trasparente 250 mg di supplemento (S2) e 10 ml di acqua purificata;
• Mettere in agitazione fino al complemento scioglimento di S2.

Fase 3 (Base + S1 + S2)

• Filtrare asetticamente S2 e aggiungerne 10 ml alla fase 1 (Base + S1) raffreddata a 45-50°C;
• Mescolare delicatamente per omogenizzare.

Fase 4 (Versamento)

• Versare la fase 3 (Base + S1 + S2) in una piastra Petri;
• Lasciar solidificare fino a che il mezzo diventa trasparente.

Fase 5 (Conservazione)

• Conservare al buio prima dell’utilizzo;
• Il terreno pronto può essere conservato per un giorno a temperatura ambiente, oppure per un mese se refrigerato a 2-8°C (sempre al buio).

Metodo

I campioni utilizzabili possono essere di diversa natura, come campioni urinari, rettali o vaginali. Questi possono essere direttamente seminati sul terreno, previo un passaggio in brodo d’arricchimento (es. Todd Hewitt).
Se il terreno è stato refrigerato, prima di seminarci i campioni, è consigliabile riportarlo a temperatura ambiente.
Dopo aver seminato il campione, il terreno va incubato a 35-37°C per 18-24 h, in condizione di aerobiosi.

Risultati attesi

La lettura delle colonie sul terreno StrepB agar è puramente qualitativa.
L’interpretazione è riportata nella Tab.2 seguente:

Immagini

I risultati della crescita sono osservabili in Fig. 2–3:

Limitazioni

Ci sono diverse limitazioni dello StrepB agar che vanno conosciute:

• La sua incubazione in atmosfera arricchita con CO₂ può dare falsi positivi;
• L’identificazione finale di S. agalactiae va comunque data con le conferme di test biochimici (es. CAMP test), immunologici (Es. agglutinazione del lattice) e in spettrofotometria di massa (Es. Maldi-Tof);
• Alcuni e rari ceppi di streptococchi di gruppo B possono richiedere ulteriori 24 h di incubazione per formare colonie visibili;
• Specifici microrganismi come Aerococcus, Lactobacillus e Leuconostoc possono formare colonie violette chiare, confondibili con quelle di S. agalactiae.
• La maggior parte degli streptococchi di gruppo A formano colonie fucsia/violette che danno falso positivo. Tuttavia, si possono differenziare da quelle del gruppo B tramite il PYR test (PYR test positivo –> Gruppo A, PYR test negativo –> Gruppo B);
• Alcuni stafilococchi possono formare colonie violette differenziabili, tuttavia, tramite il test della catalasi (catalasi negativa –> streptococchi gruppo B, catalasi positiva –> stafilococchi).

Controllo qualità

Per il controllo qualità di StrepB agar si possono sfruttare i microrganismi riportati in Tab.3:

Fonti

• CHROMagar Scheda Tecnica;
• MERCK Millipore;
• EO labs.

Crediti immagini

• Immagine in evidenza: tpm-tpm.com.tw;
• Figura 1: tpm-tpm.com.tw;
  • 2: eolabs.com;
  • 3: Bio-Rad Laboratories.

Crediti tabelle

• Tabella 1–2–3: CHROMagar Scheda Tecnica.

Approfondimenti e curiosità

• S. agalactiae in gravidanza;
• S. agalactiae – Scheda batteriologica.