Perché si usa?
Il Rambach agar (propylene glycol deoxycholate neutral red agar) consente di differenziare la Salmonella da altri microrganismi in campioni clinici e alimentari, grazie all’aggiunta di glicole propilenico al terreno di coltura. Data l’elevata specificità di tale terreno, risulta essere un ottimo supporto ad altri terreni selettivi per la Salmonella, come l’XLD Agar, per ridurre falsi positivi.
Il glicole propilenico, con l’aggiunta di un indicatore di PH, dona un caratteristico colore rosso alle colonie di Salmonella. Inoltre, per differenziare i coliformi dal patogeno, è presente un cromogeno specifico per la scissione della β-galattosidasi (caratteristica dei Coliformi). I Coliformi sono evidenti come colonie blu-verdi, altre Enterobatteriacee come Proteus o Shighella si presentano gialle o incolori.
Composizione del terreno
- Peptone 8g/l
- NaCl 5g/l
- Sodio desossicolato 1g/l
- Cromogeno 1,5 g/l
- Glicole propilenico 10,5g/l
- Agar 15g/l
Preparazione del terreno
Per la preparazione del terreno di coltura è necessario aggiungere alla polvere nutritiva, il supplemento (glicole propilenico).
1- Versare il supplemento nella quantità d’acqua necessaria, indicata sulla confezione del prodotto.
2- Aggiungere il terreno base liofilizzato.
3- Riscaldare e agitare il preparato.
Il terreno di coltura è totalmente sospeso quando non sono più presenti particelle adese alle pareti di vetro della beuta/bottiglia. Per il completo scioglimento della polvere sono necessari 20-25 minuti, per un quantitativo di 250 ml. Non bisogna nè portarlo ad ebollizione e nè autoclavarlo.
4- Raffreddare il preparato a 45-50°C e dopo circa 30 minuti, versare l’elaborato nelle piastre petri.
Le piastre allestite saranno di un colore rosa opaco. Conservare le piastre in frigo (ad una temperatura non inferiore a 6°C) per tre settimane, se ben chiuse in buste di plastica, anche fino a tre mesi.
Controllo di qualità:
- Salmonella typhimurium ATCC 14028 : Recovery ≥ 30 %, colonie rosse;
- Salmonella enteritidis ATCC 13076 : Recovery ≥ 30 %, colonie rosse;
- Salmonella 3002 : Recovery ≥ 30 %, colonie rosse;
- Salmonella 3011 : Recovery ≥ 30 %, colonie rosse;
- Escherichia coli ATCC 25922 : colonie blu-verdi;
- Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 : colonie blu-verdi;
- Proteus mirabilis ATCC 14153 : colonie gialle;
- Staphylococcus aureus ATCC 25923 : crescita inibita;
- Bacillus cereus ATCC 11778 : crescita inibita.
Immagini
Bibliografia
http://www.merckmillipore.com/IT/it/product/RAMBACH-agar,MDA_CHEM-107500#anchor_TI
Veronica Nerino