Phenol Red Carbohydrate Broth

Perché si usa?

Il Phenol Red Carbohydrate Broth è comunemente usato nel test di fermentazione dei carboidrati per differenziare i microrganismi in base al loro metabolismo fermentativo (vedi Carbohydrate Fermentation test). Il rosso fenolo è un indicatore di pH che viene utilizzato e diventa giallo al di sotto di un pH di 6,8 e fucsia sopra un pH di 7,4. Se l’organismo è in grado di utilizzare il carboidrato presente nel terreno di coltura, viene creato un sottoprodotto acido che fa virare il terreno in colore giallo. Se l’organismo non è in grado di utilizzare il carboidrato ma usa il peptone, il sottoprodotto è l’ammoniaca, che aumenta il pH del mezzo e lo fa virare in colore fucsia. Quando l’organismo è in grado di utilizzare il carboidrato, può essere prodotto gas sottoforma di bolla che verrà intrappolata all’interno della campanella di Durham. Se l’organismo non è in grado di utilizzare il carboidrato, il gas non verrà prodotto e non si formerà alcuna bolla d’aria.

Composizione del terreno

  • Trypticase o peptone 10 g;
  • Cloruro di sodio (NaCl) 5 g;
  • Estratto di manzo (facoltativo) 1 g;
  • Rosso fenolo (7,2 ml di soluzione di rosso fenolo allo 0,25%) 0,018 g;
  • Fonte di carboidrati: 10 g.

pH finale richiesto*: 7.4 ±0.2 a 25°C

Preparazione del terreno

  • Preparare il brodo mescolando tutti gli ingredienti in 1000 ml di acqua distillata/deionizzata e riscaldare delicatamente per dissolverlo (utilizzare una singola fonte di carboidrati in base alle proprie esigenze);
  • Riempire le provette da 13 x 100 mm con 4-5 ml di brodo;
  • Inserire una campanella di Durham per rilevare la produzione di gas;
  • Sterilizzare in autoclave i supporti del test preparati a 121 °C per 15 minuti (quando si utilizzano arabinosio, lattosio, maltosio, salicina, saccarosio, trealosio o xilosio, sterilizzare in autoclave a 121 °C per soli 3 minuti poiché questi carboidrati sono soggetti a degradazione in autoclave).

Quality control

Nella tabella seguente viene evidenziata nella prima colonna il microrganismo ATCC di riferimento, nella seconda colonna il tempo di incubazione, nella terza colonna la temperatura di incubazione, nella quarta colonna l’atmosfera e nell’ultima colonna la tipologia di crescita.

Phenol Red Broth with Adonitol:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Arabinose:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Serratia marcescens 
ATCC ® 8100 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Dextrose:
Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Branhamella Moraxella 
catarrhalis 
ATCC ® 25240 

18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Dulcitol:
Salmonella paratyphi 
ATCC ® 9150 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Serratia marcescens 
ATCC ® 8100 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Galactose:
Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Serratia marcescens 
ATCC ® 8100 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Glucoside:
Klebsiella pneumoniae 
ATCC ® 13883 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Edwardsiella tarda 
ATCC ® 15947 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Glycerol:
Citrobacter freundii 
ATCC ® 8090 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Salmonella enterica 
ATCC ® 14028 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Inositol:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Inulin:
Streptococcus mutans 
ATCC ® 25175 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas negative 


Streptococcus mitis 
ATCC ® 6249 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Lactose:
Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Proteus mirabilis 
ATCC ® 12453 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Maltose:
Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Proteus mirabilis 
ATCC ® 12453 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Mannitol:
Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Proteus mirabilis 
ATCC ® 12453 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Mannose:
Klebsiella pneumoniae 
ATCC ® 13883 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Proteus mirabilis 
ATCC ® 12453 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Raffinose:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Serratia marcescens 
ATCC ® 8100 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Rhamnose:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Serratia marcescens 
ATCC ® 8100 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Salicin:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Salmonella enterica 
ATCC ® 14028 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Sorbitol:
Escherichia coli 
ATCC ® 25922 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Proteus mirabilis 
ATCC ® 12453 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Sucrose:
Enterobacter aerogenes 
ATCC ® 13048 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Salmonella enterica 
ATCC ® 14028 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Trehalose:
Klebsiella pneumoniae 
ATCC ® 13883 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Morganella morganii 
ATCC ® 25830 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 


Phenol Red Broth with Xylose:
Klebsiella pneumoniae 
ATCC ® 13883 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Positive Reaction: 
yellow color change, 
gas positive 


Morganella morganii 
ATCC ® 25830 
18-48hr35°CAerobicGrowth 
Negative Reaction: 
no yellow color change, 
gas negative 

Immagini

Figura 1 – da sinistra a destra: 1) tubo non inoculato, 2) fermentazione del glucosio da parte di E. coli con produzione di gas (visibile bolla d’aria nella campanella di Durham), 3) fermentazione del glucosio da parte di S. sonnei senza produzione di gas (non visibile bolla d’aria nella campanella di Durham), 4) assenza di fermentazione da parte di P. aeruginosa.
Figura 2 – P. vulgaris in Phenol Red Broth con Lattosio
Figura 3 – P. vulgaris in Phenol Red Broth con Glucosio

Figura 4 – Terreno non inoculato di Phenol Red Broth con Destrosio

Figura 5 – i possibili risultati del terreno con rosso fenolo includono: (A) formazione di acido e gas (la bolla è indicata dalla freccia), (B) formazione di acido senza gas, (C) controllo non inoculato, (D) formazione di alcuni sottoprodotti alcalini e (E) assenza di acido o gas formazione.

Fonti

Informazioni su Francesco Centorrino 64 Articoli
Laureato in biologia ed appassionato di tecnologia, cinema, scienza e fantascienza.

Commenta per primo

Rispondi