L’R2A agar è un terreno agarizzato con proprietà nutritive ridotte (concentrazione bassa di peptoni) e viene utilizzato principalmente per la crescita di batteri eterotrofi nelle acque potabili trattate. Il terreno è raccomandato dalla farmacopea europea (european pharmacopoeia) per la conta microbica totale attraverso l’utilizzo delle membrane filtranti. L’utilizzo del terreno in oggetto si basa sul principio per il quale molti microorganismi batterici vivono in ambienti idrici con limitate quantità di sostanze nutritive ed a temperature vicine a quella ambiente e, pertanto, si coltivano meglio su terreni colturali con basse concentrazioni di peptoni a temperatura ambiente.
Composizione del terreno
Estratto di lievito
0.50 g/L
roteose Peptone
0.50 g/L
Idrolizzato acido di caseina
0.50 g/L
Glucosio
0.50 g/L
Amido solubile
0.50 g/L
Di potassio fosfato
0.30 g/L
Sodio piruvato
0.30 g/L
Agar
14.0 g/L
Magnesio solfato anidro
24.0 mg
pH finale
7.2 ± 0.2 a 25 ºC
Preparazione del terreno
preparazione in polvere
Sospendere 17,12 g di polvere in 1000 ml di acqua distillata fredda;
Portare ad ebollizione fino a completa soluzione;
Autoclavare a 121°C per 15 minuti (non surriscaldare).
Preparazione in flacone
In un bagnomaria termoregolato a 100°C introdurre i flaconi e riscaldare fino ad ebollizione;
Attendere che il terreno arrivi a dissoluzione completa;
Raffreddare a 45-50°C e versare in piastre sterili.
Risultati della crescita
Microrganismo
Ceppo certificato ATCC
Crescita
Pseudomonas aeruginosa
ATCC® 9027
Buona
Bacillus subtilis
ATCC® 6633
Buona
Enterococcus faecalis
ATCC® 19433
Buona
Escherichia coli
ATCC® 8739
Buona
Staphylococcus aureus
ATCC® 6538
Buona
Candida albicans
ATCC® 10231
Buona
Aspergillus brasiliensis
ATCC® 16404
Buona
Immagini
Figura 1 – Piastre di R2A agar a confronto su microorganismi isolati da fonti diverse. Questa immagine esemplifica le differenze morfologiche che si possono manifestare con specie batteriche differenti.Figura 2 – Piastra di R2A agar in cui si evidenziano morfologie microbiche differenti di batteri isolati dal terreno.Figura 3 – Crescita di specie microbiche e fungine differenti sul terreno R2A agar.
Procedura del test
Preparare diluizioni seriali del campione di acqua per ottenere un adeguato numero di colonie finali per il conteggio ed allestire due set di piastre per ciascuna diluizione;
Inoculare il terreno per inclusione, spatolamento o con il metodo delle membrane filtranti;
Incubare in atmosfera aerobica un set di piastre a 30-35°C per un tempo compreso tra 3-5 giorni e l’altro set a 20-25°C per un tempo compreso tra 5-7 giorni;
Al termine del periodo di incubazione delle piastre, riportare la conta come CFU/ml di campione tenendo conto del fattore di diluizione ed annotando tempo e temperatura di incubazione.
