Regan-Lowe agar

Utilizzo

Regan-Lowe agar è un terreno selettivo utilizzato in ambito clinico per la coltivazione e l’isolamento selettivo di Bordetella pertussis, agente eziologico della pertosse, da campioni nasofaringei. I suoi ideatori, Regan e Lowe, idearono questo terreno, che da loro prende il nome, cercando di individuare un terreno adatto al trasporto di campioni di pertosse.

Composizione del terreno

Il Regan-Lowe agar è composto da:

Elementi del terreno	Quantità	Funzione
Agar	12,0 g	–
Amido, solubile	10,0 g	–
Carbone attivo	4,0 g	Il carbone, insieme all’amido, ha la funzione di neutralizzare gli acidi grassi e perossidi che possono risultare tossici per Bordetella.
Sangue di cavallo defibrinato	100 ml	Arricchimento aggiuntivo che supporta la crescita di Bordetella spp
Cefalexina (opzionale)	40 µg per ogni mL	Rientra tra le cefalosporine, classe di antibiotici beta-lattamici, questo ha il ruolo di inibire la normale flora batterica del rinofaringe.
Amfotericina B	0,05 g	Inibisce la crescita di funghi e lieviti
Estratto di manzo	10,0 g	Presente nel terreno per rifornire il batterio di molecole importanti come amminoacidi e altre sostanze azotate necessarie per la crescita
Peptone di caseina	10,0 g	–
NaCl	5,0 g	Necessario per mantenere l’equilibrio osmotico
Acido nicotinico (niacina)	0,01 g	Vitamina aggiuntiva che promuove la crescita dei batteri

Tabella 1 – Composizione di Regan-Lowe

Il terreno può essere preparato senza cefalexina, si consiglia di prepararlo in parallelo al Regan-Lowe agar, poiché una piccola percentuale di ceppi batterici (<10%) di B. pertussis non crescono su piastre selettive. Inoltre il mezzo non selettivo viene utilizzato per ottenere colture con una maggiore crescita in modo tale che possano essere utilizzate per ulteriori test, come il test di agglutinazione o immunofluorescenza.

Preparazione del terreno

Per la preparazione del terreno è necessario:

Sospendere 51 g in 1 L di acqua distillata;
Riscaldare agitando frequentemente il contenitore e portare ad ebollizione per un minuto;
Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti;
Raffreddare a 45 – 50 °C e aggiungere asetticamente 100 ml di sangue di cavallo defibrinato e 10 ml di supplemento Regan-Lowe;
Distribuire in piastre Petri sterili.

Tuttavia, prima di inocularle il terreno nella capsula Petri, questo deve essere portato a temperatura ambiente prima di poter strisciare i campioni.

Conservare i terreni preparati a 2-8 °C al riparo dalla luce diretta e polvere, in un luogo asciutto, in contenitori chiusi ermeticamente a 2 – 25 ºC.

Risultati della crescita

Sul terreno Regan-Lowe Agar, Bordetella pertussis forma colonie piccole, convesse e lisce. Le colonie presentano una colorazione brillante con un colore che a seconda dei tempi di incubazione può variare dal grigio al bianco. Inoltre è possibile osservare l’area di emolisi intorno alle colonie essendo questo un batterio emolitico. (Fig. 1)

Immagini

Limitazioni del terreno

Il terreno è destinato all’isolamento primario di Bordetella spp; si raccomanda di eseguire test biochimici, immunologici, molecolari o di spettrometria di massa su colonie provenienti da colture pure per l’identificazione completa.

Ismael Sanchez Polanco

Fonti

Regan, J., F. Lowe. 1977. Enrichment Medium for the Isolation of Bordetella. J. Clin. Microbiol. 6(3): 303-309.
Comparison of three kinds of blood and two incubation atmospheres for cultivation of Bordetella pertussis on charcoal agar. J E Hoppe and M Schlagenhauf.
Zimbro, M.J., D.A. Power, S.M. Miller, G.E. Wilson, J.A. Johnson. 2009. Difco & BBL Manual of Microbiological Culture Media, 2nd ed. Becton Dickinson and Company. Sparks, MD.