Solfito-Polimixina-Sulfadiazina Agar

Principio

Il Solfito-Polimixina-Sulfadiazina Agar (SPS) è un terreno di coltura per la ricerca di Clostridium perfringens (Fig.1) nelle matrici alimentari.
Quest’ultimo è infatti un batterio patogeno Gram positivo, bastoncellare ed anaerobio, responsabile di diverse intossicazioni alimentari.

Nello specifico, possono provocare danno all’uomo i ceppi di tipo A che producono la CPE, ovvero l’enterotossina del C. perfringens.
La CPE è costituita da un polipeptide da 35,5 kDa che viene assemblato e poi rilasciato nel mezzo al termine del processo di sporulazione.
La tossina è termolabile (disattivata a 74°C), tuttavia, può accumularsi nei cibi cotti in modo sbagliato e portare allo sviluppo di sintomi dopo 10-12 h dall’ingestione degli stessi.
Inoltre, il pericolo maggiore è costituito dalle spore termostabili che possono sopravvivere ai processi di cottura per poi portare allo sviluppo di colonie di microrganismi vitali.
I sintomi comprendono crampi addominali, diarrea, forte nausea e febbre alta con, nei casi peggiori, degenerazione in enterite necrotizzante.

Preparazione e composizione

La formula per preparare il terreno SPS è riportata in Tabella 1:

Per la preparazione è necessario disciogliere 40,03 g di polvere in 1 l di acqua distillata.
Il tutto va portato all’ebollizione per un completo scioglimento delle polveri, dopodiché il terreno andrà autoclavato per 15 minuti a 121°C.
Fatto ciò, potrà essere colato all’interno di piastre Petri sterili e lasciato raffreddare fino a solidificazione.
Il pH finale del mezzo deve essere di 7,0 +/-0,2.

Metodo

Il Solfito-Polimixina-Sulfadiazina Agar è stato sviluppato da Angelotti e collaboratori, a partire dalla precedente idea di Mossel che prevedeva l’impiego dei tubi Miller-Prickett.

Tra i principali nutrienti del terreno vi sono l’idrolisato enzimatico di caseina e l’estratto di lievito come fonti di azoto, ma anche il complesso della vitamina B ed altri nutrienti essenziali per la crescita di C. perfringens. Quest’ultimo infatti riduce il solfito a solfuro che reagisce con il ferro del citrato ferrico dando un precipitato visibile perché nerastro.
Al contempo, la presenza delle sulfadiazine e della polimixina B inibisce lo sviluppo della maggior parte degli altri batteri Gram positivi e negativi.
Quindi, se nel campione è presente C. perfringens si formeranno caratteristiche colonie nere sul terreno, date dalla reazione sopra citata.
E’ possibile utilizzare il terreno con la tecnica delle diluzioni seriali ed è sempre necessario incubarlo in anaerobiosi.
In ogni caso, è consigliabile confermare la presenza di C. perfringens anche tramite ulteriori test d’identificazione biochimica.

Risultati e immagini

L’aspetto del Solfito-Polimixina-Sulfadiazina Agar con colonie di C. perfringens è visibile in Fig. 2-3:

Controllo qualità

Per il controllo qualità dell’SDS agar è bene far riferimenti ai seguenti punti:

• Aspetto della polvere: polvere libera dal colore crema-giallo.
• Aspetto del terreno solido: stabile, confrontabile con un gel di agarosio 1,39%, colore ambrato leggermente opalescente.
• pH: 6,80-7,20.
• Incubazione: 35-37°C per 18-48 h in condizioni di anaerobiosi.
• Microrganismi: riportati in Tabella 2.

Fonti

• HIMEDIA Scheda Tecnica;
• Angelotti R., Han H. E., Foter M. J. and Lewis K. H., 1962, Appl. Microbiol., 10:193.
• Mossel D. A. A., De Bruit A. S., Van Dipen H. M. J., Vendring C. M. A. and Zoutewelle G., 1956, J. Appl. Microbiol., 19:142.
• Yao P. and Annamaraju P. (2022). Clostridium perfringens. Bookshelf NIH.

Crediti immagini

Immagine in evidenza: scharlab.com;

• Figura 1: Fine Art America;
• Figura 2: novachem.com.ec;
• Figura 3: scharlab.com.

Crediti tabelle

• Tabella 1 e 2: HIMEDIA Scheda Tecnica.

Approfondimenti

• Video 1: Clostridium perfringens – an Osmosis Preview;

• Video 2: Clostridium perfringens lab.