Principio
Il China Blue Lactose Agar (Fig.1) è un terreno di coltura pensato per il differenziamento e il conteggio dei batteri del latte.
Generalmente il latte prodotto da animali sani non contiene microrganismi dannosi, tuttavia, questi possono successivamente contaminare il latte a partire dalla superficie della mucca, dall’ambiente circostante e da pratiche di manipolazione (es. mungitura) scorrette.
Il China Blue Lactose Agar, formulato per la prima volta da Brandl e Sobeck-skal, è un terreno sviluppato proprio per differenziare i microrganismi capaci, da quelli non capaci, di fermentare il lattosio del latte.
Il terreno in questione non contiene sostanze inibenti, perciò, ogni microrganismo presente nel campione di latte, se posto nelle giuste condizione di crescita, si svilupperà vigorosamente.
Composizione e preparazione
Come fonti nutrizionali del terreno sono presenti il peptone e l’HB peptone, che forniscono il giusto apporto di azoto e di carbonio. Come fonte energetica è presente il lattosio, per chi lo sa utilizzare, mentre il clorurlo di sodio aiuta a mantenere l’equilibrio osmotico del mezzo.
Il colorante è il china blue che vira da incolore a blu in presenza di pH acido dovuto alla fermentazione del lattosio.
Quindi, i microrganismi lattosio-fermentanti producono scarti acidi e fanno virare il colorante verso il blu, mentre in presenza dei microrganismi non lattosio-fermentanti il terreno resterà incolore.
La formula del terreno China Blue Lactose Agar è riportata in Tabella 1:
| Ingredienti | Quantità (g/l) |
| Peptone | 5,000 |
| HM Peptone | 3,000 |
| Lattosio | 10,000 |
| Cloruro di sodio | 5,000 |
| China Blue | 0,300 |
| Agar | 15,000 |
Per prepare il terreno è necessario seguire questi passaggi:
- Sospendere 38,3 g delle polveri in 1 l di acqua purificata/distillata;
- Far bollire fino al completo scioglimento delle polveri;
- Autoclavare a 121°C per 15 minuti;
- Lasciar raffreddare fino a 45-50°C;
- Mescolare bene e colare in piastre Petri sterili.
Metodo
Il campione (es. latte) deve essere prelevato in maniera sterile e poi seminato sull’apposito terreno di coltura, successivamente incubato a 35-37°C per 22-24 h.
La specifica metodica (specialmente per il conteggio) è contenuta all’interno degli standard (es. Standard Methods for the Examination of Diary Products,1978).
Risultati
Una volta terminato il periodo di incubazione si può procedere con l’interpretazione dei risultati.
Come detto in precedenza, quando sul terreno sono presenti microrganismi lattosio-fermentanti questi, come conseguenza delle loro attività metaboliche, libereranno scarti acidi che faranno virare il colorante verso il blu.
Al contrario, qualora non fossero presenti microrganismi lattosio-fermentanti, questi non produrranno scarti acidi e non faranno virare il colorante che resterà perfettamente incolore.
Immagini
Quando descritto in precedenza è osservabile in Fig. 2 e Fig.3:
Limitazioni
Vi sono alcune limitazioni per questo terreno di coltura che devono essere conosciute nel dettaglio:
- il pH del mezzo deve essere testato prima di utilizzarlo;
- per l’identificazione specifica dei microrganismi devono essere fatte ulteriori analisi biochimiche e sierologiche;
- per il conteggio devono essere seguiti i parametri richiesti dagli standard.
Controllo qualità
Per il controllo qualità devono essere rispettati i seguenti requisiti (Tabella 2):
Aspetto polveri: colore dal verde al giallo, aspetto omogeneo e liscio.
Texture: dopo la preparazione il terreno deve apparire gommoso, confrontabile con un gel di agarosio 1,5%.
Aspetto del terreno pronto: azzurrino chiaro, trasparente e opalescente.
pH: 6.80-7.20
Risultati: osservabili dopo un periodo di incubazione di 22-24 h a 35-37°C.
| Microrganismo | Inoculo (CFU) | Crescita | Colore delle colonie |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | 50-100 | Lussureggiante >=70% | Blu |
| Escherichia coli ATCC 25922 | 50-100 | Lussureggiante >=70% | Blu |
| Proteus vulgaris ATCC 13315 | 50-100 | Lussureggiante >=70% | Incolore |
| Salmonella Typhi ATCC 6539 | 50-100 | Lussureggiante >=70% | Incolore |
| Shigella flexneri ATCC 12022 | 50-100 | Lussureggiante >=70% | Incolore |
| Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 25923 | 50-100 | Lussureggiante >=70% | Incolore |
Fonti
- HIMEDIA Scheda Tecnica;
- American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 1978, 14th Ed., Washington D.C;
- Thomas S. B., 1974, the Microflora of Bulk Collected Milk- Part 2, Dairy Ind. Int. 39 (8): 279;
- Merck Microbiology Manual 12th Edition.
Crediti immagini
- Immagine in evidenza: wikimedia commons;
- Figura 1: atomscientific.com;
Crediti tabelle
- Tabella 1 e 2: HIMEDIA Scheda Tecnica.
