Utilizzo
Il terreno di coltura di tipo Spectra™ MRSA è stato sviluppato per rilevare il batterio Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA) in modo più rapido ed efficiente rispetto ai terreni tradizionali (ad esempio SBA e MSA) partendo da tamponi nasali o da campioni di sangue. Questo terreno, in particolare, è in grado di identificare e differenziare rapidamente i ceppi di S. aureus resistenti all’antibiotico meticillina da quelli che ne sono suscettibili utilizzando cromogeni (sostanze che vengono scisse da un enzima caratteristico dei microrganismi bersaglio, conferendo così colorazioni chiaramente distinguibili ai diversi tipi di colonie), che portano alla formazione di colonie blu denim, eliminando quindi la necessità di analisi biochimiche e test di sensibilità antimicrobica.
Funzionamento
Il terreno di coltura di tipo Spectra™ MRSA utilizza un particolare cromogeno che produce un colore blu denim come risultato dell’attività della fosfatasi batterica, un enzima presente in tutti gli MRSA. Per consentire al terreno di differenziare accuratamente gli MRSA, il terreno contiene anche una combinazione di composti antibatterici progettati per inibire la crescita di un’ampia varietà di microrganismi concorrenti. Sono inclusi anche i composti che incoraggiano la produzione del marcatore di patogenicità MRSA, assicurando l’espressione dell’enzima fosfatasi e fornendo così maggiore sensibilità e specificità.
Composizione del terreno Spectra™ MRSA
La formula classica del terreno Spectra™ MRSA contiene i seguenti elementi:
- mix di peptoni: 25 g;
- mix di sali: 25 g;
- caolino: 13 g;
- mix cromogeno: 2 g;
- agenti selettivi: 4 ml;
- agar: 15 g;
- acqua demineralizzata: 1000 ml
pH 7,3 ± 0,2 ad una temperatura di 25°C.
Procedura di analisi e risultati
Per prima cosa, lasciare che le piastre contenenti il terreno Spectra™ MRSA raggiungano la temperatura ambiente, dopodiché:
- inoculare il campione appena possibile dopo averlo ricevuto in laboratorio;
- incubare le piastre in presenza di ossigeno per 24 ore a 35-37°C;
- osservare le caratteristiche, la morfologia e le reazioni cromatiche della colonia
Interpretazione del risultato: dopo 24 ore di incubazione, gli MRSA appariranno come colonie blu denim piccole o medie su sfondo bianco, mentre altri microrganismi (non MRSA) mostreranno una marcata inibizione o produrranno colonie bianche. Se dopo 24 ore di incubazione non si osservano colonie blu denim, il campione è considerato negativo e le piastre devono essere eliminate.
Limitazioni sull’utilizzo del terreno Spectra™ MRSA
Il terreno Spectra™ MRSA possiede alcune limitazioni: in particolare, microorganismi con pattern enzimatici atipici possono dare risultati anomali, inoltre, le esigenze di crescita di alcuni MRSA possono portare alla loro parziale o completa inibizione in coltura. È poi importante sottolineare che l’incubazione in CO2 può ridurre il la velocità della crescita batterica e provocare potenzialmente ad un falso negativo.
Fonti
- https://www.merckmillipore.com/IT/it/products/industrial-microbiology/bioburden-testing/microbiological-water-testing/water-testing-for-food-and-beverage-industry/rapid-cultural-testing-methods/chromogenic-media/3Zyb.qB.d7UAAAFDD3FUTxI.,nav
- Spectra MRSA, a New Chromogenic Agar Medium To Screen for Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus