Utilizzo
Il terreno di Robertson (Robertson’s cooked meat medium, RCM medium), è uno dei brodi di arricchimento più noti per la coltura di microrganismi anaerobi e microaerofili. In particolare, si utilizza per Clostridium spp., dove si può apprezzare l’eventuale attività saccarolitica o proteolitica (o entrambe) a seconda della specie. Questo terreno è in grado di supportare la crescita sia di batteri sporigeni che non sporigeni.
E’ un terreno di arricchimento ottimo per i microrganismi anaerobi, che possono essere conservati anche per lunghi periodi; la Food and Drug Administration ne raccomanda l’utilizzo per il campionamento di Clostridium perfringens.
Viene chiamato anche CMB Broth Cooked Meat Broth, (CMB Broth), poiché utilizza brodo di carne e un macinato magro di cuore di bue.
Composizione del terreno
Terreno di Robertson mg/l acqua distillata.
- Carne cotta 250 mg
- Digerito peptico di tessuto animale 17.5 mg
- Destrosio 5.0 mg
- Cloruro di sodio 5.0 mg
- Estratto di lievito 5.0 mg
- Depositi di ferro 10 mg
- Emina 10 ml
- Vitamina K 10 ml
pH finale: 6.8 +/- 0.3 a 25ºC
Come Funziona?
La carne cotta fa da nutrimento per vari tipi di microrganismi; i peptoni, l’estratto di lievito e il destrosio sono sostanze nutritive essenziali. I depositi di ferro, così come l’emina e la vitamina K, supportano la crescita di anaerobi obbligati. Per quanto riguarda soprattutto i clostridi, la valutazione finale si basa sull’attività saccarolitica, indicata da torbidità del terreno e colorazione rossa dei frammenti di carne, o proteolitica, visibile con un annerimento del terreno.
Preparazione del terreno
Il terreno di Robertson si prepara a partire da granuli liofilizzati reperibili in commercio.
- Dispensare 1 g di terreno in un supporto sterile, come flaconi o fiale.
- Aggiungere 10 ml di acqua distillata, mescolare e far sedimentare per 5 minuti.
- Sterilizzare il terreno in autoclave, con tappo allentato, a 121°C per 15 minuti. Quando raffreddato, chiudere il tappo e segnare la data.
- Lasciare il terreno in un luogo fresco e al riparo dalla luce, assicurandosi che il contenitore sia sigillato.
Risultati della crescita
| Batterio | Aspetto del terreno |
| Controllo Negativo | Terreno di aspetto limpido. |
| Clostridium perfringens | Anaerobio saccarolitico (i pezzi di carne nel terreno virano sul rosso) |
| Clostridium tetanii | Anaerobio proteolitico (annerimento della carne) |
Immagini
Limitazioni all’utilizzo del terreno
Essendo un brodo di arricchimento, in cui possono crescere molteplici specie batteriche, l’identificazione finale del microrganismo richiede sempre indagini successive. Inoltre, alcune specie batteriche, a seconda dei diversi ceppi, possono variare le caratteristiche proteolitiche e/o saccarolitiche. Di conseguenza, l’interpretazione richiede particolare attenzione.
Le modalità di conservazione del terreno devono seguire rigorosamente le indicazioni.
